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蛋白质纯化的一般注意事项

本文摘要:蛋白质提纯的一般注意事项 在展开任何一种蛋白质提纯得时候,都要时刻留意确保它的平稳,维护它的活性,有一些标准化的注意事项必须牢记,它们还包括: 1、操作者尽量置放冰上或者在冷库内展开。2、不要过于熟,蛋白浓度保持在μg/mL~mg/mL。3、适合的pH,除非是展开探讨层析,所用于的缓冲溶液pH防止与pI完全相同,避免蛋白质的溶解。4、用于蛋白酶抑制剂,避免蛋白酶对目标蛋白的水解;在提纯细胞中的蛋白质时,重新加入DNA酶,水解DNA,避免DNA对蛋白的污染。

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蛋白质提纯的一般注意事项 在展开任何一种蛋白质提纯得时候,都要时刻留意确保它的平稳,维护它的活性,有一些标准化的注意事项必须牢记,它们还包括: 1、操作者尽量置放冰上或者在冷库内展开。2、不要过于熟,蛋白浓度保持在μg/mL~mg/mL。3、适合的pH,除非是展开探讨层析,所用于的缓冲溶液pH防止与pI完全相同,避免蛋白质的溶解。4、用于蛋白酶抑制剂,避免蛋白酶对目标蛋白的水解;在提纯细胞中的蛋白质时,重新加入DNA酶,水解DNA,避免DNA对蛋白的污染。

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5、防止样品重复冻融和轻微摇动,防止蛋白质的变性。6、缓冲溶液成分尽可能仿真细胞内环境。7、在缓冲溶液中重新加入0.1~1mmol/L DTT(或β-巯基乙醇),避免蛋白质的水解。

8、特1~10mmol/L EDTA金属螯合剂,避免重金属对目标蛋白的毁坏。9、用于消毒溶液,避免微生物生长。


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